پایان نامه ارشد:بررسی پلی مورفیسمT) 509C-)، ژن TGF-β1 در بيماران مبتلا به ریفلاکس وزیکویورترال(VUR) به روش PCR-RFLP در استان کرمان

متن کامل پایان نامه مقطع کارشناسی ارشد رشته :زیست شناسی

گرایش :علوم سلولی و مولکولی

عنوان :بررسی پلی مورفیسمT) 509C)، ژن TGF-β1 در بيماران مبتلا به ریفلاکس وزیکویورترال(VUR) به روش PCR-RFLP در استان کرمان

دانشگاه آزاد اسلامی

 واحد علوم دارویی

دانشکده علوم و فناوری های نوین، گروه زیست شناسی

 

پایان نامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد(M.Sc)

گرایش: علوم سلولی و مولکولی

 

عنوان:

بررسی پلی مورفیسمT) 509C)، ژن TGF-β1 در بيماران مبتلا به ریفلاکس وزیکویورترال(VUR) به روش PCR-RFLP در استان کرمان

 

استاد راهنما:

جناب آقای دکتر محمد رضا بذر افشانی

 

سال تحصیلی:93-1392

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمی شود

(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)

تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :

(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)

 

عنوان                  فهرست مطالب                  شماره صفحه

چکیده فارسی…………1

فصل اول: کلیات تحقیق

1-1 ریفلاکس وزیکویورترال(VUR) 3

1-2 شیوع VUR. 4

1-3 سبب شناسی VUR. 5

1-4 VUR از منظر کلینیکی. 6

1-5 نشانه شناسی VUR. 10

1-6 پروگنوزیس VUR. 10

1-7 روش های تشخیصیVUR. 10

1-7-1 سونوگرافی. 11

1-7-2 سيستوگرام در حال ادرار(MCUG or VCUG) 11

1-7-3سیستوگرافی تخلیه ای رزونانس مغناطیسیMRVCUG 12

1-7-4 سیستوگرافی رادیو نوکلئویدRNC 12

1-7-5 سیستوگرافی رادیونوکلئوید مستقیم DRC. 13

1-7-6 سیستوگرافی رادیونوکلئوید غیر مستقیمIRC. 14

1-8بهبود خود به خود VUR. 15

1-9 درمان ریفلاکس وزیکویورترال. 16

1-9-1 پیشگیری آنتی بیوتیکی. 16

1-9-2 جراحی باز 17

1-9-3 تزریق آندوسکوپی. 17

1-10   VURفامیلی. 18

1-11 شناسایی یک ژن یا لوکوس ویژه مرتبط با VUR. 19

1-11-1  uroplakin. 20

1-11-2 SLIT2/ROBO2. 20

1-11-3 Transforming growth factor-β1. 20

1-12 اصول کلی واکنش زنجیره ای پلیمراز 25

1-12-1 مواد مورد نیاز برای واکنش PCR. 26

1-13 آنالیز PCR-RFLP. 27

1-14روش های آنالیز برای مطالعات وابستگی SNP. 28

1-15 اهمیت موضوع. 29

1-16 فرضیه های مطالعه 31

1-17 هدف از مطالعه 31

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

2-1 بررسی ارتباط پلی مورفیسم ژن TGF-β1 با VUR فامیلی. 34

فصل سوم: مواد و روش ها

3-1 نوع مطالعه 37

3-2 جامعه مورد مطالعه 38

3-2-1 گروه بیمار 38

3-2-2 گروه سالم 38

3-3 نمونه‌گیری. 38

3-4 متغيرهاي تحقيق. 38

3-5 استخراج DNA. 39

3-6  اندازه گیری کیفیت و غلظت DNA. 40

3-7 دستورالعمل PCR برای نشانگر PCR-RFLP. 41

3-7-1 طراحی پرایمرها اختصاصی برای تعیین SNP. 41

3-7-2  dNTPs 41

3-7-3 کلرید منیزیم(MgCl2) 42

3-7-4 بافر واکنش PCR. 42

3-7-5 آنزیم Taq Polymerase. 42

3-7-6  آب دوبار تقطیر شده استریل. 42

3-8 راه اندازی واکنش PCR. 42

3-9 برنامه دمايي PCR. 43

3-10  الکتروفورز ژل آگارز 43

3-10-1مواد لازم الکتروفورز ژل آگاروز2%.. 43

3-10-2 طرز تهیه ژل آگارز 2%.. 43

3-10-3طرز تهیه بافر TBE 1X. 44

3-10-4طرز تهیه اتیدیوم‌برماید 44

3-11 هضم آنزیمی. 44

3-12 روش تجزیه و تحلیل داده ها : 45

3-13بررسي تعادل هاردی-واینبرگ. 46

3-14 آزمون كاي دو )رابطه بين دو متغير كيفي) 47

3-15 روش آماری. 47

3-16 آزمون استقلال کای اسکوئر 47

3-17آزمون نیکویی برازش کای اسکوئر 47

3- 18 انحراف معیار از میانگین (SE, SEM) 48

فصل چهارم: نتایج

4-1 نتایج هضم آنزیمی. 50

4-2مقايسه ي توزيع فراواني پلي مورفیسم ژن TGFB1 در كودكان مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال با كودكان سالم 51

4-3نحوه آنالیز ژنوتیپ هاي CC،TC و TT. 52

4-3-1 آنالیز ژنوتیپ هاي CC،TC وTT در دو گروه بيماران مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال و گروه كنترل زمانيكه ژنوتايپ CCبه عنوان مرجع (رفرنت ) باشد. 52

4-3-2  آنالیز ژنوتیپ هاي CC،TC و TT در دو گروه بيماران مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال و گروه كنترل زمانيكه ژنوتايپ TT به عنوان مرجع (رفرنت ) باشد. 54

4-4 آنالیز آلل هاي T و C در دو گروه كودكان مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال و كودكان سالم (گروه كنترل) 55

4-5 بررسی تعادل هاردی واینبرگ در گروه كودكان مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال. 57

4-6 بررسی تعادل هاردی واینبرگ در گروه كودكان سالم (كنترل) 58

4-7 انحراف معیار از میانگین. 59

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

5-1 پیشنهادات: 65

منابع 66

خلاصه انگلیسی. 70

عنوان                                                     فهرست اشکال                                                    شماره صفح

شکل1-1 سیستم درجه بندی مطالعه جهانی ریفلاکس……………………………………………………………………………………………..3

شکل2-1 اتصال یوترووزیکال………………………………………………………………………………………………………………………………………..4

شکل3-1 نمایی از کانال حالب درون دیواره مثانه……………………………………………………………………………………………………….7

شکل4-1 مثال های کلینیکی از مطالعه ریفلاکس………………………………………………………………………………………………………9

شکل5-1 VCUG در کودک 4 ساله نشان دهده برگشت دو طرفه ادرار ……………………………………………………………….12

شکل6-1 نقشه ژن TGF-beta1 انسانی……………………………………………………………………………………………………………………23

شکل7-1 تصویر شماتیک نحوه انجام PCR  ……………………………………………………………………………………………………………26

شکل8-1 روش های آنالیز برای مطالعات وابستگی SNP ……………………………………………………………………………………….29

شکل1-3 تصویر مربوط به بررسی نتیجه استخراج DNA روی ژل آگارز………………………………………………………………..40

شکل1-4 قطعه حاصل از تکثیر  پی سی آر (808 جفت باز)…………………………………………………………………………………..50

شکل2-4 سه ژنوتيپ حاصل از هضم آنزيم……………………………………………………………………………………………………………….50

عنوان                                                        فهرست جداول                                                  شماره صفحه

جدول1-1 ژنها و مکان های ژنی بالقوه دخیل در  تکامل کلیه و یا مثانه …………………………………………………………………..24

جدول 1-3 مربوط به متغیرهای تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………….39

جدول 2-3 پرایمرها اختصاصی…………………………………………………………………………………………………………………………………..41

جدول 3-3 مواد و مقادیر لازم برای واکنش هضم آنزیمی یک نمونه………………………………………………………………………..45

جدول 4-3 محاسبه مرحله به مرحله ژنوتیپ های مورد انتظار………………………………………………………………………………..46

جدول 1-4 فراواني ژنوتيپ هاي CC،TC و TT…………………………………………………………………………………………………….51

جدول 2-4 فراواني ژنوتايپ هاي CC،TC و   TT…………………………………………………………………………………………………53

جدول 3-4 آزمون کای اسکوئر در دو گروه كودكان مبتلا به ريفلاكس و كودكان سالم………………………………………….53

جدول 4-4 تخمین ریسک برای هنگامی که cc رفرنت فرض شده………………………………………………………………………….53

جدول5-4 فراواني ژنوتايپ هاي CC،TC و   TT …………………………………………………………………………………………………..54

جدول6-4 آزمون کای اسکوئر ژنوتیپ TT رفرنت در نظر گرفته می شود………………………………………………………………54

جدول 7-4 تخمین ریسک برای هنگامی که TT رفرنت فرض شده………………………………………………………………………..55

جدول8-4 فراواني آلل هاي T و C…………………………………………………………………………………………………………………………….55

جدول9-4آزمون کای اسکوئر برای بررسی آلل هاي Tو C……………………………………………………………………………………….56

جدول10-4 تخمین ریسک برای آلل ها TوC………………………………………………………………………………………………………….56

جدول11-4 فراوانی ژنوتیپ های مشاهده شده و مورد انتظار در گروه كودكان مبتلا به ريفلاكس وزيكويورترال…………………………………57

جدول12-4 آزمون کای اسکوئر نیکویی برازش برای بررسی HWE در كودكان مبتلا …………………………………………58

جدول13-4فراوانی ژنوتیپ ها ی مشاهده شده و مورد انتظار در گروه كودكان سالم………………………………………………58

جدول14-4 آزمون کای اسکوئر نیکویی برازش  برای بررسی HWE در گروه كودكان سالم………………………………….59

جدول15-4 محاسبه sem داده ها در spss……………………………………………………………………………………………………………..59

جدول 1-5 مقایسه کلی نتایج ژنوتیپ ها و آلل های مورد مطالعه…………………………………………………………………………..63

چکیده فارسی

مقدمه و هدف: دسته بندی فامیلی ریفلاکس وزیکویورترال پیشنهاد می دهد که فاکتورهای ژنتیکی نقش مهمی در پاتوژنز ریفلاکس وزیکویورترال دارند. TGF-β1 یک پپتید چند عملکردی است که کنترل رشد و تمایز را در بسیاری از انواع سلول ها بر عهده دارد. پلی مورفیسم های TGF-β1 با احتمال ابتلا به VUR و  UTI مرتبط می باشند. با توجه به اهمیت پلی مورفیسم T509C-  ژن TGF-β1 و ارتباط آن با ریفلاکس وزیکویورترال اولیه، در این مطالعه تلاش کردیم ارتباط این پلی مورفیسم با بیماری ریفلاکس وزیکویورترال را پیدا کنیم.

روش کار: این مطالعه شامل 160 نمونه و کنترل بود، ژنوتایپینگ با روش PCR-RFLP انجام گرفت و محصولات PCR توسط آنزیم BSU36I مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند و سپس بر روی ژل آگارز 3 درصد بررسی شدند و در نهایت داده ها با استفاده از نرم افزار SPSSv.19 مورد تجزیه تحلیل آماری قرار گرفتند.

نتایج: فراوانی ژنوتیپ TT در گروه بیماران افزایش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت( 30 درصد بیمار در مقابل 5/7 درصد شاهد 0/0 PV≤) ،اگر چه فراوانی ژنوتیپ CC کاهش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت (5/32 درصد بیمار در مقابل 75/58درصد شاهد 001/0 PV≤). همچنین، فراوانی آلل Tدر گروه بیماران افزایش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت( 75/48 درصد بیمار در مقابل37/24 درصد شاهد 00/0 PV≤ ) و فراوانی آللC  نیز در گروه بیماران کاهش قابل توجهی را نسبت به گروه کنترل نشان داد ( 25/51درصد بیمار در مقابل 62/75 درصد شاهد 00/0 PV≤ ) .

نتیجه گیری: یافته­های این مطالعه برای اولین بار ارتباط پلی مورفیسم TT509- TGF-β1  با بیماری ریفلاکس وزیکویورترال را  در جمعیت ایرانی نشان می دهد. افرادی با ژنوتیپ TT 509- احتمال ابتلای بیشتری به ریفلاکس وزیکویورترال دارند.

کلید واژه ها:ریفلاکس وزیکویورترال ،PCR-RFLP ، پلی مورفیسم 509- ، ژن TGF-β1

فصل اول:

کلیات تحقیق

1-1 ریفلاکس وزیکویورترال(VUR)

ریفلاکس وزیکویورترال[1] یک جریان برگشتی ادرار از مثانه به طرف حالب[2]و به سمت کلیه در اثر اختلال در اتصال وزیکویورتریک است. عملکرد صحیح این اتصال معمولا شبیه به یک دریچه یک طرفه است که به جریان ادرار اجازه می دهد از حالب به طرف مثانه حرکت کند و در حین ادرار کاملا بسته شود تا از جریان برگشتی ادرار به حالب که در اثر فشار حاصل از تخلیه ادرار ممکن است رخ دهد جلوگیری کند. عملکرد موثر دریچه به عملکرد هماهنگ چندین عامل وابسته است که شامل طول زیر موکوسی حالب، عرض ورودی حالب، عضلات مثلثی و حالب و حرکات دودی هماهنگ حالب است شکل2-1 محل اتصال وزیکویورتریک را نشان می دهد.VUR به طور معمول در حین تخلیه شدن، زمانی که فشار درون مثانه افزایش می یابد تشخیص داده می شود سیستم مطالعات جهانی ریفلاکس را بر حسب سختی در 5 گروه رتبه بندی کرده است (شکل1-1) که عواملی مثل طول جریان برگشتی، تورم یا آماس و انحنای حالب ها در این رتبه بندی دخیل بوده اند، درشکل 4-1 نیز مثال های کلینیکی از این درجه بندی را می­توانید مشاهده کنید.

تعداد صفحه : 52

قیمت : 14700 تومان

———–

——-

پشتیبانی سایت :               [email protected]

در صورتی که مشکلی با پرداخت آنلاین دارید می توانید مبلغ مورد نظر برای هر فایل را کارت به کارت کرده و فایل درخواستی و اطلاعات واریز را به ایمیل ما ارسال کنید تا فایل را از طریق ایمیل دریافت کنید.

--  --